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          水浴氮吹儀雙脫氧合成末端

          發表時間:2017/1/6 9:13:22 閱讀次數:

          -./鏈的延伸終止在 %%.23處。 !!水浴氮吹儀雙脫氧合成末端終止法 -./序列分析操作中要用四個反應管,每一管都加入 -./模板, -./聚合 酶,四種 %.23,其中一種 %.23是用同位素標記的。除此之外,每一管還要加入一種 %%.23,即 /管加入 %%/23,2管加入 %%223,4管加入 %%423,5管加入 %%523。以 /管為例,當模板上堿基是 2時,反應體系 中有兩種堿基可與之配對: %/23和 %%/23。如果是 %/23與之配對,引物的延伸還能繼續下去。如果是 %%/23與之配對,引物的延伸就會到此終止。 /管中會出現 長短不一,但總是終止在 /位的核苷酸鏈。另外三管中出現 的情形也如此,即四個反應管分別存在以四種不同核苷酸為 01末端的長度不等的核苷酸鏈。這四個反應管中核苷酸鏈的 總的結果是一系列長度只差一個核苷酸的 -./聚合鏈。聚 合反應結束后,把 ;管內的產物分別加到超薄的聚丙烯酰 胺—尿素變性凝膠板上電泳,這種電泳分辨能力可達到相差 一個核苷酸的水平,四條泳道形成不同的電泳條帶。經過放 射自顯影,從下向上讀即是新合成鏈 71!01的堿基排列順序 (圖 89 <)。>*? 4&@A$#B法,該法是先用同位素 對 -./片段的末端進行標記,然后用專一的化學試劑對特 定的堿基進行化學修飾,經過修飾的堿基從糖環上脫落,同 時和該糖環相連的磷酸二酯鍵斷


          裂,產生在該修飾堿基處斷 開的長短不一的 -./片段。硫酸二甲酯專一修飾鳥嘌呤,甲酸修飾嘌呤堿基,肼修飾嘧啶堿基,在有 .*5@存在的條件下,肼只修飾胞嘧啶。分別用上述化學試劑降解 -./,然后電泳。電泳條帶從下向上讀 即是待測 -./ 71!01的核苷酸序列(圖 89 8:)。 第五節 !轉基因動物、克隆動物和基因剔除技術 一、轉基因動物 !!轉基因動物(B#*+C,$+&’ *+&?*@C)是利用基因工程和胚胎工程技術,改變動物遺傳性狀的新方法,是將 外源基因導入動物的受精卵,再將受精卵植入到代孕動物的輸卵管或子宮中培育的動物(圖 89 88)。轉 基因動物中的外源基因已與動物本身的基因組整合,外源基因隨細胞分裂而增殖,在體內得到表達,并傳 圖 89 8:!化學修飾裂解法測序原理 第十七章 #基因技術#"! 給下一代。也有人先將外源基因導入精子或卵細胞,再讓導入外源基因的精子或卵細胞受精,培育轉基因 動物。 ##轉基因動物能夠創造醫學研究需要的動物模型、改 良動物品質、培育動物新品種。例如,將大鼠的生長激 素基因導入小鼠受精卵培育的轉基因小鼠體重是普通 小鼠的二倍,成為超級鼠。 ##人體內有許多種活性肽和生長因子,它們在體內的 生理功能十分重要,但含量極少,提取和純化都很困難。 可利用轉基因技術將人類的這些基因轉入動物的受精 卵,培育轉基因動物,從轉基因動物的某些產物中提取 這些基因的產物。如將人類的基因轉入奶牛,從牛奶里 提取人類基因的產物;驅⑷祟惢蜣D入雞,從雞蛋內 提取基因產物。這些轉


          基因動物就像工廠一樣可以源 源不斷的提供人類需要的產品,因此稱其為動物工廠或 生物工廠。 ##外源基因能夠轉入動物,建立轉基因動物,也可以 轉入植物,建立轉基因植物。以這些轉基因生物為直接 食品或作為原料加工生產的食品為轉基因食品。轉基 因食品的出現有望幫助解決人們吃飯的難題。但對轉 基因食品的安全性還沒有取得共識,對目前應不應該把 轉基因食品投放市場還存在著爭論。 二、克隆動物 ##克隆是英語 $%&’(的音譯,即無性繁殖?寺游 是生物體通過體細胞進行的無性繁殖以及由無性繁殖 形成的基因型完全相同的后代個體組成的種群?寺 動物是多種生物技術結合的產物,是把細胞核轉移到去 核的卵細胞中,培育新型生物品種的細胞工程技術? 隆動物技術主要包括三個步驟。 # #!*制備成熟的卵細胞。 # #)*細胞核移植,將供體細胞的細胞核與去核的 卵細胞融合成一個雜合細胞。 # #+*將“核質融合”的卵細胞移植到借腹懷孕動 物的子宮發育直到出生(圖 !" !))。 ##克隆動物的遺傳信息完全來自于提供細胞核的 動物,即克隆動物是供核動物的復制品。由此可見, 克隆動物與轉基因動物不同。轉基因動物是將外源 基因轉入動物的受精卵內,產生后代個體的方式仍 然是有性繁殖,只不過后代細胞染色體內插入了外 源基因?寺游锸菍⒐w細胞核移入到去除了細 !*提取卵細胞; )*提取體細胞; +*卵細胞去核; ,*體細胞核轉胞核的未受精卵細胞內,是細胞無性繁殖的產物。 入去核卵細胞; -*篩選;

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